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聚丙烯酰胺凝胶是聚丙烯酰胺凝胶电泳的必要介质,通过聚丙烯酰胺凝胶可以使得分离物质的分子以及分子电荷量,但往往很多情况,聚丙烯酰胺凝胶未能够发生聚合,导致凝聚凝胶的愿望不能够实现,那么引起聚丙烯酰胺凝胶未聚合原因有哪些?有哪些方法能够解决呢?
聚丙烯酰胺凝胶的工作原理
聚丙烯酰胺凝胶的聚合原理就是丙烯加成或聚合反应的成功进行。一般认为两种分子通过反应生成一种物质的化学反应称之为加成反应,就相当于聚合或者化和反应,通过加成反应,使得聚丙烯酰胺凝胶的双键或三键重新打开,并且在各分子键上分别连接新的基团,使得分子间的链接更加的稳固。
聚丙烯的聚合原理图
聚丙烯酰胺凝胶为什么要聚合?聚丙烯酰胺凝胶聚合有啥优点?其优点如下所示:
1、聚丙烯酰胺凝胶并非天然的物质,而是经过人工的合成,其浓度的配比比率不同,链接结构、长短、孔隙大小等都有一定的缺点,但选择了聚合,那么不仅具有良性的机械性能,同时也具有适宜的间隙宽度,同时分子量也会逐渐的增大,粘度逐渐增大。
2、聚丙烯酰胺凝胶稳定,无色透明,容易观察,甚至可以使用测量仪器直接测量。
3、聚丙烯酰胺凝胶可以精炼,污染小,可以通过自由基实现聚合链接反应。
4、聚丙烯酰胺凝胶没有离子的侧基基团,不会轻易的与样品进行相关反应。
引起聚丙烯酰胺凝胶未聚合原因及解决方法如下:
1、忘记加催化基过硫酸铵,或者过硫酸铵失效,
解决方法:催化剂是形成聚丙烯酰胺凝胶反应的必要材料,如果没有硫酸铵等盐类催化剂,那么在聚丙烯酰胺凝胶过程中就无法获得到自由基,也就无法发动聚合反应,故在准备凝胶之前,一定要检查各方面的材料是否到位,最好是现配现用。
2、存放时间太久
解决方法:不同型号的聚丙烯酰胺产品即有相同的影响因素,但是其中最要命的就是聚丙烯酰胺的存放时间,如果存放时间超越了所允许存放的周期,也就是说聚丙烯酰胺已经过期了,一旦过期,其他的操作再怎么正规也是徒劳,所以在使用聚丙烯酰胺之前 ,一定要在包装上检查聚丙烯酰胺的到期时间,如果到期,一律换掉。
3、溶液的pH不对,偏酸性.
解决方法:凡是溶液就一定涉及到PH值,PH值的不正确控制,那么聚丙烯酰胺凝胶效果一定受到影响,在准备凝胶之前,先让专业工作人员通过PH试纸来检测溶液的PH,如果呈酸性,那么就不合适,直到把溶液调试程碱性,也即是PH值大于7即可。
4、温度过低
解决方法:温度高聚合快,温度低聚合慢,但是并不是说温度高就一定效果好,温度太高会导致一些反应条件失效,只有合适的温度才是反应的有利条件,通过一些专业测试温度的仪器,像温度计等,一般温度在40度左右是最好的,别忘记了。
5、材料中含有一些物质,减慢反应速度。甚至是抑制聚合反应,使聚合反应终止
解决方法:很多物质都不是纯净的物质,里面含有太多的杂质,可能是操作上的失误所引起,也可能是认为的因素,所以在购买之前定要选择正规的厂家,同时购买之后不要放在空气中,避免不良反应,另外即使在聚合过程中,反应液也要与空气隔绝。
不同的聚丙烯酰胺产品有着诸多相似的影响因素,除了上述的几点,其交联剂、催化剂失效、凝胶浓度太低、环境因素都是影响聚丙烯酰胺凝胶未成功聚合的原因,只有创造了合适的条件,保证充足的聚合时间,聚丙烯酰胺凝胶才能够成功聚合。